重视阀门上密封检查 如果截止阀的阀杆和阀体内孔的加工质量不好,或因长期使用导致磨损而使填料与阀杆的配合间隙增大,都会导致介质由阀杆处泄漏,发酵罐,这种现象被称为阀门“上密封泄露”。然而,在发酵生产中,阀门的上密封检查经常被忽视。2003年,阀门的上密封泄漏事故就曾使新疆某虫草发酵车间连续1个月染菌倒罐,企业经济损失很大。因此,对发酵用的阀门不仅要重视密封副结构的泄漏,更要重视上密封泄漏。 在发酵生产中,由于发酵工艺的要求,一些阀门并不是按流体流向安装的,如在一些发酵罐中,取样阀门是靠近发酵罐的*i一阀门,为了在取样前对该阀门进行灭菌,阀门的安装和发酵液流向是相反的,菌丝体发酵罐,这样才能在取样阀底部加装一个小的附加阀门使蒸汽流通。该取样阀的上密封结构的密封要求非常高,否则发酵液可能渗入该取样阀的上密封结构中甚至从上密封结构中泄漏,从而造成发酵染菌。
发酵罐排气过滤器的维护与保养 进口小型全自动发酵罐一般带有排气过滤器,这一方面是为了防止带菌的气溶胶污染大气,另一方面可以预防感染噬菌体(因为活菌细胞排到大气中很容易招来噬菌体感染)。但是,这种排气过滤器容易被培养基的泡沫污染,影响发酵过程的通气率。有些人为此把排气过滤器拆除,其实是因噎废食,并不可取。 要防止排气过滤器被泡沫污染,全自动发酵罐,首先要控制好培养基灭菌时的泡沫。由于小型发酵罐灭菌时相对于大型发酵罐蒸汽通量大,泡沫更容易发生,因此我们在灭菌前要适当多加一些消沫剂,灭菌时要严格控制蒸汽通入量。一般来说,灭菌初始时在确保蒸汽流通的前提下要尽量把蒸汽阀门开小一些,如果发现升温慢,再逐渐开大阀门,这样就可以避免产生大量泡沫。如果一开始就把蒸汽阀门开得很大,泡沫上来后就会措手不及,难以控制。这时应把所有进、排气阀门都关闭,然后在密切监视泡沫的同时缓慢打开排气阀门泄压,待表压降到接近于零后再重新缓慢通入蒸汽灭菌。 对于在发酵过程中产生的泡沫,要加强观察,特别是发酵前期和后期泡沫产生较快时,如果发现自动消沫装置不足以很快消除泡沫,就要手动加入消沫剂。即使没有排气过滤器,从保护发酵罐搅拌轴封和防止染菌方面考虑,也同样要在灭菌和发酵过程中防止泡沫**罐。
发酵罐发酵过程的操作 1.接种:接种方法可采用火焰接种法或差压接种法。 火焰接种法:在接种口用酒精火圈消毒,然后打开接种口盖,平行发酵罐,迅速将接种液倒入罐内,在把盖拧紧。 差压法:在灭菌前放入垫片,接种时把接种口盖打开,先倒入一定量的酒精消毒。待片刻后把种液瓶的针头插入接种口的垫片。利用罐内压力和种液瓶内的压力差,将种液引入罐内,拧紧盖子。 2.罐压 发酵过程中须手动控制罐压,即用出口阀控制罐内压力。调节空气流量的,须同时调节出口阀,应保持罐内压力恒定大于0.03Mpa。 3.溶解氧(DO)的测量和控制 溶解氧的标定:在接种前,在恒定的发酵温度下,将转速及空气量开到较i大值时的溶解氧DO值作为**。 发酵罐发酵过程的溶解氧DO测量和控制:DO的控制可采用调节空气流量和调节转速来达到。较简单是转速和溶氧的关联控制。其次则必须同时调节进气量(手动)控制。有时需要通入纯氧(如在某些基因工程菌的高密度培养中)才能达到要求的DO值。 4.pH的测量与控制 pH值的校正:在灭菌前应对PH电极进行PH值的校正。 发酵罐在发酵过程中PH值的控制使用蠕动泵的加酸加碱来达到的,酸瓶或碱瓶须先在灭菌锅中灭菌。